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恒遠(yuǎn)獨(dú)家ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)技巧讓您贏在起跑線

閱讀次數(shù):998   發(fā)布時(shí)間:2014/12/18 10:52:07

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1. 標(biāo)本及采集、貯運(yùn)因素
   ① 嚴(yán)重溶血:以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中,殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性,催化底物顯色造成假陽性;
   ② 混有紅細(xì)胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈
   ③ 如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng);
   ④ 標(biāo)本凝固不全,有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè),常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測(cè)定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果;
   ⑤ 采血試管洗滌不徹底、反復(fù)使用易交叉污染
   ⑥ 塑料試管能吸附抗原物質(zhì) ,樣本久置在塑料管內(nèi)會(huì)使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。
    血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè),嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。一般說來,在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃,標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致血清IgG 聚合,使間接法的 試劑 本底加深。超過一周測(cè)定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡;鞚峄蛴谐恋淼难鍢(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測(cè)。反復(fù)凍融會(huì)使 抗體 效價(jià)跌落,所以測(cè) 抗體 的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè),宜少量分裝冰存。
2. 之操作技術(shù)的影響
   ① 應(yīng)保證清潔,整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至限度。從而提高檢測(cè)的特異性。并得到更準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
   ② 合理安排檢測(cè)量,以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。
   ③ 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
   ④ 用洗板機(jī)洗板時(shí),保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干:還要防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
   ⑤ 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用。
    希望以上的ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)技巧內(nèi)容能夠給您帶來實(shí)質(zhì)上的幫助,更多相關(guān)試劑盒的資料詳情歡迎您來電咨詢。
 

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