干轉(zhuǎn)移

trans-bot處裝配

1。準(zhǔn)備轉(zhuǎn)移緩沖液。

2。電泳后的凝膠，平衡轉(zhuǎn)移緩沖液。平衡有利于消除電泳緩沖鹽和洗滌劑。所需的時(shí)間平衡是依賴于凝膠厚度。例如，15分鐘為0.75毫米，SDS - PAGE凝膠。

3。切膜的層面的凝膠。濕膜慢慢滑動(dòng)它在45°角度轉(zhuǎn)移到緩沖區(qū)，讓它浸泡15 - 30分鐘。

4。切濾波器紙張尺寸的凝膠。兩根粗過濾紙（或六片薄濾）凝膠需要為每個(gè)膠/膜三明治。完全飽和濾紙浸泡在轉(zhuǎn)移緩沖液。

5。如果有一個(gè)以上的全尺寸的凝膠是在同一時(shí)間內(nèi)傳輸，剪下一塊透析膜與適當(dāng)?shù)?/span>分子量截止到層面的凝膠。完全濕透析膜轉(zhuǎn)移緩沖液。

單位組裝標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)移

（戴上手套，這一程序，以避免污染的膜。）

1。拆下安全蓋和不銹鋼陰極組件。

2。將預(yù)浸片過濾紙上的鉑陽極。滾管或試管在濾紙表面（如搟面杖）排除所有的空氣氣泡。如果薄過濾紙使用，重復(fù)2張buffer-soaked過濾紙。

3。把濕印跡媒體頂部的過濾紙。推出所有氣泡。

4。小心地將平衡凝膠上的轉(zhuǎn)印膜，將凝膠膜的中心。轉(zhuǎn)移是不完整的，如果任何一部分的凝膠印跡介質(zhì)外。推出所有氣泡。

5。把另一片預(yù)浸泡濾紙頂部的凝膠，仔細(xì)去除氣泡之間的凝膠和過濾紙。如果細(xì)過濾紙使用，三片上方的凝膠，消除泡沫從每一層之間。

6。如果有一個(gè)以上的全尺寸的凝膠被轉(zhuǎn)移，地方片預(yù)浸透析膜過濾器頂部的紙堆。重復(fù)步驟2。多達(dá)四個(gè)迷你凝膠可以轉(zhuǎn)移的同時(shí)，把它們并排在陽極平臺(tái)。

7。小心地將陰極到堆棧。出版社從事鎖存器與導(dǎo)柱無干擾的過濾紙堆。

8。地方上的安全蓋裝置。插頭插進(jìn)電源。極性是正常轉(zhuǎn)移到陽極陰極，即，紅的紅和黑的黑風(fēng)口的電源供應(yīng)器。

注意：不要反向極性。這將導(dǎo)致?lián)p壞的不銹鋼陰極。

9。打開電源。轉(zhuǎn)移迷你凝膠15 - 30分鐘。在10月15日五大凝膠可以轉(zhuǎn)移的30分鐘到1個(gè)小時(shí)。在15 - 25訴不超過25伏與儀器。一個(gè)電流限制（3毫安/厘米~ 2大型凝膠；5.5毫安/厘米迷你凝膠）的建議，防止過度加熱運(yùn)行期間。在強(qiáng)大的領(lǐng)域發(fā)展這種裝置，轉(zhuǎn)移可能并不總是定量。一定量的蛋白質(zhì)可能被轉(zhuǎn)移通過膜上下過濾紙。（即恒流~ 15線2迷你凝膠）

10。下列轉(zhuǎn)移，使電源關(guān)閉，并斷開單元從電源供應(yīng)器。刪除安全罩和陰極組件。拋棄過濾紙（和透析膜，如果使用）。傳輸效率可以監(jiān)測染色的凝膠與考馬斯亮藍(lán)R -蛋白質(zhì)染色或酶標(biāo)儀的銀染試劑盒。另外，預(yù)分子量標(biāo)準(zhǔn)可以使用，或部分的膜可以染色，總蛋白膠體金，生物印跡總蛋白染色，或陰離子染料如氨基黑。zeta-probe膜可以染色的biotin-blot總蛋白染色。

十二烷基硫酸鈉可能被添加到緩沖區(qū)1增加蛋白洗脫從凝膠：

48三甘氨酸，39毫米，1.3毫米（20%甲醇），十二烷基硫酸鈉（0.0375%），9.2。

溶解5.82克和2.93克甘氨酸三，十二烷基硫酸鈉和0.0375克或3.75毫升的10%十二烷基硫酸鈉在ddh2o（加入200毫升甲醇）；調(diào)整體積為1升的稀ddh2o。

不添加酸或堿調(diào)整pH值。

托賓轉(zhuǎn)移緩沖sds-proteins使用硝酸纖維素（甲醇）或zeta-probe膜（無甲醇）：

在25毫米，192毫米甘氨酸（20%甲醇），PH值8.3

溶解3.03克和14.4克甘氨酸三ddh2o（加入200毫升甲醇）；調(diào)整容積為1升的ddh2o。

不添加酸或堿調(diào)整pH值

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