脫氧核糖核酸的房屋設(shè)施的“實(shí)時(shí)”或聚合酶鏈反應(yīng)動(dòng)力學(xué)儀，美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)模型7700序列檢測(cè)系統(tǒng)（熒光定量儀）。聚合酶鏈反應(yīng)（聚合酶鏈反應(yīng)）發(fā)生了革命性變化的檢測(cè)脫氧核糖核酸和核糖核酸。少為單拷貝一個(gè)特定序列可以具體擴(kuò)增和檢測(cè)。理論上，有一個(gè)定量關(guān)系的起始靶序列和數(shù)量的產(chǎn)品在任何給定周期。在實(shí)踐中，雖然，這是一個(gè)共同的經(jīng)驗(yàn)復(fù)制反應(yīng)產(chǎn)生不同數(shù)量的產(chǎn)品。發(fā)展實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)消除了變異與傳統(tǒng)的定量聚合酶鏈反應(yīng)，從而使常規(guī)和可靠的定量聚合酶鏈反應(yīng)產(chǎn)品。該儀器，因此，現(xiàn)在提供了調(diào)查的能力以執(zhí)行非常靈敏，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性測(cè)量基因表達(dá)水平。此外，該儀器可用于其他應(yīng)用如病毒載量檢測(cè)，進(jìn)行等位基因歧視研究，優(yōu)化反應(yīng)條件。

答：實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)化學(xué)

實(shí)時(shí)系統(tǒng)的反應(yīng)是提高探針為基礎(chǔ)的，而不是嵌入，產(chǎn)物的檢測(cè)。主要缺點(diǎn)嵌入的檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物積累是具體的和非特異性產(chǎn)物產(chǎn)生信號(hào)。另一種方法，5 ＇核酸檢測(cè)，提供了一個(gè)實(shí)時(shí)檢測(cè)方法特異擴(kuò)增產(chǎn)物。在放大過(guò)程中，退火的探針的靶序列，生成一個(gè)基板切割的5’核酸酶活性脫氧核糖核酸酶酶時(shí)，從上游引物延伸到該地區(qū)的探針。這依賴于聚合確保裂解探頭只發(fā)生如果目標(biāo)序列的擴(kuò)增。

發(fā)展的熒光探針，使得有可能消除后的聚合酶鏈反應(yīng)分析處理探針降解。該探測(cè)器是一個(gè)寡核苷酸與記者熒光染料和染料附著劑。雖然探頭是完整的，靠近止渴大大減少所發(fā)出的熒光染料記者的örster共振能量轉(zhuǎn)移（共振）通過(guò)空間。探針的設(shè)計(jì)與合成已簡(jiǎn)化的發(fā)現(xiàn)，適當(dāng)?shù)?/span>淬火觀察為探針，記者在5 ＇端和淬火在3 ＇端。

圖1圖所發(fā)生的熒光探針在延長(zhǎng)階段的反應(yīng)。如果靶序列，探針退火下游從一個(gè)入門網(wǎng)站，切割的5’核酸酶活性的脫氧核糖核酸酶作為引物延伸。該裂解探頭分開的記者染料止渴染料，增加染料記者信號(hào)。卵裂消除探針從目標(biāo)鏈，使引物延伸繼續(xù)結(jié)束的模板鏈。因此，列入探頭不抑制整個(gè)反應(yīng)過(guò)程。額外的記者染料分子被裂解從各自的探針每個(gè)周期的影響，增加了熒光強(qiáng)度成正比的擴(kuò)增生產(chǎn)。

利用熒光探針在核酸結(jié)合染料，具體雜交探針和目標(biāo)的要求產(chǎn)生的熒光信號(hào)。因此，熒光探針，特異性擴(kuò)增由于mis-priming或引物二聚體工件不會(huì)產(chǎn)生信號(hào)。另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是它們可以是熒光探針標(biāo)記不同，區(qū)別記者染料。通過(guò)使用探針標(biāo)記不同的記者，擴(kuò)增不同的序列，可以發(fā)現(xiàn)在一個(gè)單一的反應(yīng)。缺點(diǎn)是不同的熒光探針，探針必須綜合檢測(cè)不同序列。

回到頂部

B .儀器儀表

踝臂指數(shù)棱鏡7700序列檢測(cè)系統(tǒng)是一個(gè)靈活的系統(tǒng)設(shè)計(jì)，充分利用的好處，熒光探針檢測(cè)。7700個(gè)系統(tǒng)有一個(gè)內(nèi)置的thermalcycler和直接激光通過(guò)光纖電纜的96個(gè)樣本的威爾斯。熒光發(fā)射流經(jīng)電纜攝像儀。因?yàn)?/span>每個(gè)照射順序，尺寸的陣列可用于光譜分辨率的熒光燈。因?yàn)檫@7700種儀器檢測(cè)整個(gè)熒光光譜，該系統(tǒng)能夠識(shí)別和量化每個(gè)樣品以及多熒光。該軟件分析數(shù)據(jù)，首先計(jì)算貢獻(xiàn)的每個(gè)組成部分染料的實(shí)驗(yàn)譜。每一個(gè)記者的信號(hào)，然后除以熒光內(nèi)部參考染料（火箭）為規(guī)范non-pcr相關(guān)熒光波動(dòng)發(fā)生交叉或時(shí)間。使用這種內(nèi)部參考染料，啟用的能力來(lái)區(qū)分流感