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ELISA試劑盒、人ELISA試劑盒、大鼠ELISA試劑盒、小鼠ELISA試劑盒、生物試劑、抗體、血清、進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品、微生物培養(yǎng)基
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產(chǎn)品簡介

Casp-12,小鼠半胱氨酸蛋白酶12ELISA試劑盒原理

Casp-12,小鼠半胱氨酸蛋白酶12ELISA試劑盒原理

價(jià)格:電議

采購度:154    原產(chǎn)地:美洲

發(fā)布時(shí)間:2017/9/19 14:48:19

Casp-12,小鼠半胱氨酸蛋白酶12ELISA試劑盒原理用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠半胱氨酸蛋白酶12(Casp-12)的含量。

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詳細(xì)信息
      中文名稱:Casp-12,小鼠半胱氨酸蛋白酶12elisa試劑盒原理

組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

規(guī)格:96T/48T

性狀:液體

保存:2-8

有效期:6個(gè)月

實(shí)驗(yàn)原理

用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗該指標(biāo)抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD),計(jì)算樣品濃度。

操作說明

1.試劑盒保存:-20(較長時(shí)間不用時(shí));2-8(頻繁使用時(shí))。

2.濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。

3.中、英文說明書可能會(huì)有不一致之處,請以英文說明書為準(zhǔn)。

4.剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì),此為正常現(xiàn)象,不會(huì)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標(biāo)試劑

6ml×1

8

標(biāo)準(zhǔn)品(240 ng/L

0.5ml×1

3

標(biāo)包被

12孔×8

9

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2張  

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1個(gè)

標(biāo)本要求 

1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

120 ng/L

5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

60 ng/L

4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

30 ng/L

3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

15 ng/L

2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

7.5 ng/L

1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品*終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻

溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

溫育:操作同3。

洗滌:操作同5。

顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

終止:每孔加終止50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

標(biāo)本處理

1、 只對試劑盒本身負(fù)責(zé),不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。

2、 實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量,如果標(biāo)本濃度過高,應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行稀釋,使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

3、 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性,并注意留存樣本。

4、 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致  ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。

5、 若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素 較多,如:細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等,所以可能存在檢測不出的情況。

6、 某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。

7、 建議使用新鮮樣本,保存時(shí)間過長可能會(huì)存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。

更新時(shí)間:2024/12/23 9:38:44

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